PCR (polymerase chain reaction) ou AMPLIFICATION EN CHA?NE PAR POLYMéRASE

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La PCR, l'usine flexible des chercheurs

La polyvalence des procédures est le résultat de l'adaptation de la PCR aux questions sans cesse nouvelles des chercheurs. Les applications de la PCR sont de ce fait considérables.

Détermination des séquences d'ADN?: l'explosion de la génomique

La plus connue des applications de la PCR est le séquen?age des molécules d'ADN, c'est-à-dire la détermination de la succession des nucléotides qui les composent, source d'une quantité considérable d'informations en biologie.

Les techniques de séquen?age ont beaucoup évolué depuis les méthodes manuelles des débuts, remplacées par la migration des fragments d'ADN marqués par des sondes fluorescentes à l'intérieur de capillaires dans la première génération d'appareils de séquen?age. L'évolution des machines à séquencer a été très rapide et, même si on entrevoit le séquen?age direct de l'ADN sans amplification préalable, toutes les méthodes exigent de disposer de quantités significatives d'ADN, donc d'ADN amplifié (fig.?2).

Cinétique d’une réaction de PCR

Dessin : Cinétique d’une réaction de PCR

Dessin

Au temps 0, l’ADN, les amorces et le milieu réactionnel sont mélangés. En a, l’ensemble est brusquement porté à 95 0C. En b, la température est abaissée et les amorces s’hybrident aux séquences dont elles sont complémentaires, puis, en c, la température est élevée à environ 70 ou...?

Crédits?: Encyclop?dia Universalis France

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Dans les technologies de séquen?age dites ??de deuxième génération??, on amplifie la totalité du génome en amplifiant au hasard un très grand nombre de petits fragments qui ne sont pas définis a priori. Ces petits fragments sont ensuite séquencés en parallèle, par centaines de milliers ou de millions. La séquence initiale de l'ADN est reconstituée à partir de ces millions de courtes séquences, grace à des programmes de la bio-informatique. Toutes les machines actuelles exigent donc une étape d'amplification de l'ADN par PCR rendue indépendante de la séquence génomique, par l'addition aux extrémités des fragments d'une courte séquence d'ADN synthétique qui sert d'amorce universelle à plusieurs centaines de milliers ou de millions de fragments d'ADN. Ces fragments sont isolés physiquement dans des microréacteurs liquides ou sur une surface solide. Cette méthode permet de s'affranchir de la principale limitation de la PCR ciblée?: la spécificité des amorces qui nécessite la connaissance a priori de la séquence cible (fig.?3). L'ensemble est rapide et peu onéreux?: le séquen? [...]

Diagnostic d’un agent pathogène

Dessin : Diagnostic d’un agent pathogène

Dessin

L’ADN total est extrait d’une biopsie faite sur un malade et soumis à une PCR en utilisant des amorces spécifiques d’un agent pathogène donné ou de sa famille moléculaire. Après amplification, les produits de réaction peuvent être séparés par électrophorèse et identifiés par leur...?

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Généalogie du dodo

Généalogie du dodo
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Appariement des brins d’ADN

Appariement des brins d’ADN
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Cinétique d’une réaction de PCR

Cinétique d’une réaction de PCR
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Diagnostic d’un agent pathogène

Diagnostic d’un agent pathogène
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écrit par :

  • : ma?tre de conférences au Muséum national d'histoire naturelle, Paris

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Autres références

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POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR)

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BACTÉRIOLOGIE

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Pour citer l’article

Véronique?BARRIEL, ??PCR (polymerase chain reaction) ou AMPLIFICATION EN CHA?NE PAR POLYMéRASE??, Encyclop?dia Universalis [en ligne], consulté le 29 septembre 2020. URL?: http://www.bonoaldea.com/encyclopedie/pcr-amplification-en-chaine-par-polymerase/

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